双抗体夹心法是一种广泛应用于抗原检测的重要技术。其操作步骤如下：

一、固相抗体的制备

首先，将特异性抗体与固相载体连接，以形成固相抗体。接着，通过洗涤过程去除未结合的抗体及杂质，确保固相抗体的纯度。

二、抗原结合

添加待检标本，使其与固相抗体反应一段时间。此过程中，标本中的抗原将与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。随后，进行洗涤以去除未结合的物质。

三、酶标抗体结合

接下来，加入酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。经过彻底洗涤后，固相载体上的酶量与标本中待测物质的量存在正相关关系。

四、底物反应与结果分析

除此之外，添加底物，夹心式复合物中的酶将催化底物转化为有色产物。根据颜色反应的强度，可以对该抗原进行定性或定量检测。

应用范围及适用性

基于相同原理，可以制备固相抗原和酶标抗体结合物，利用双抗原夹心法检测标本中的抗体。在临床检验中，该方法适用于检测多种大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP和hCG等。只需获得针对受检抗原的特异性抗体，即可用于固相载体的包被和制备酶标抗体。建议在选择抗体来源时，尽量选用不同种属的动物，以增强检测的特异性。例如，在使用单克隆抗体时，应挑选针对抗原上不同决定簇的单抗进行包被和制备。

钩状效应的关注

在一步法检测中，当标本中待测抗原浓度过高时，过量的抗原会分别与固相抗体及酶标抗体结合，而不会形成“夹心复合物”。这种现象与沉淀反应中的抗原过剩情况相似，可能导致假阴性的结果，被称为钩状效应（hook effect）。因此，在测定高度浓缩的物质（如血清中的HBsAg、AFP和尿液中的hCG）时，应注意检测范围的最高值。

避免干扰因素

在应用双抗体夹心法时，还需关注类风湿因子（RF）的潜在干扰。RF作为一种自身抗体，能与多种动物IgG的Fc段结合，可能导致假阳性结果。采用F（ab'）或Fab片段作为酶结合物可以有效消除RF的干扰。目前，是否受RF影响已成为评估双抗体夹心法ELISA试剂的重要指标。

总结

双抗体夹心法适用于检测二价以上的大分子抗原，而不适合小分子单价抗原的检测。通过以特异性抗原制备酶标抗原，此方法可以无需稀释标本，直接用于测定，因此具有较高的敏感度。抗HBs的检测常采用该方法。关键在于酶标抗原的制备，需根据抗原结构的不同寻找合适的标记方法。在生物医疗领域，尊龙凯时致力于提供高质量的检测解决方案，以助力临床诊断的精准性和可靠性。